تهیه ی محیط کشت

مقدمه

آشنایی با وسایل آزمایشگاه

اتوکلاو:وسیله است که توسط آن کلیه وسائل آزمایشگاهی و محیط های کشت قبل از استفاده و محیط های کشت میکروبی و غیره توسط حرارت مرطوب ، استریل می شوند . این دستگاه قادر است بخار آب اشباع شده را با حرارت 121 درجه سانتیگراد ایجاد نماید که این درجه حرارت در شرایط بخار ایجاد شده می تواند موجب تخریب ساختمان میکروب ها و هاگ آن ها شده و تقریبا باعث نابودی تمام میکروارگانیسمهای شناخته شده شود.

اتو یا انکوباتور(گرمخانه):دستگاهی است که توسط آن گرمای لازم جهت رشد باکتریها بعد از مرحله کشت ، فراهم می شود.محیط های کشت (مایع و جامد) را بعد از کشت دادن در درون این دستگاه قرار داده و درجه حرارت مورد نیاز باکتری را توسط دستگاه تنظیم می کنیم و بعد تا مدت معین محیط های کشت در آن باقی می مانند. دمای درون اطاقک انکوباتور توسط یک دماسنج کنترل می شود.وهمچنین دارای شیشه ای است که تبادل هوا را کمتر می کند.

فور الکتریکی : دستگاهی است که توسط آن یکسری از وسائل آزمایشگاه را با حرارت خشک استریل می کنند. این وسایل باید حتما فلزی یا شیشه ای باشند که مقاوم به حرارت خشک باشند. دمای لازم برای استریل کردن توسط فور 180 درجه و زمان آن حدود 3 ساعت می باشد. بعد از اتمام کار استریل کردن و قبل از باز کردن درب دستگاه باید توجه داشت که باید دستگاه سرد شده باشد تا از شکستن وسایل شیشه ای جلوگیری شود.درجه حرارت داخل فور توسط یک دماسنج به تنظیم کننده حرارت(ترموستات) محیط کشت متصل می باشد و این دماسنج دما را به ما نشان می دهد.

آنس : وسیله ای با نوک تیز یا حلقوی برای برداشتن نمونه میکروبی و کشت آن برروی محیط کشت

لوله دورهام:برای پی بردن به وجود یا عدم وجود گاز تولید شده توسط باکتری

پیپت پاستور:شیشه ای لوله ای شیشه ای است که نوک آ ن بسیار نازک شده است و برای برداشتن مقادیر بسیار کم مایعات وهمچنین جابجایی باکتری روی محیط کشت مورد استفاده قرار می گیرد.

ترکیبات محیط کشت:

Agar ingredients: peptone from meat; meat extract; Agar-agar

Broth ingredients: peptic digest of animal, tissue, Yeast extract, beef extract, sodium chloride

شرح کار

الف)وسایل و مواد آزمایش:

مواد آگار و براث-ارلن-اتوکلاو-همزن-هیتر-آب مقطر-لوله ی آزمایش-پنبه-فویل-انکوباتور-یخچال-پتری دیش

ب)روش کار:

Nutrient agar: در ابتدا 2 گرم ازماده ی جامد آگار را برداشته داخل ارلن می ریزیم و با 100سی سی آب مقطر حل می کنیم و محلول را روی هیتر قرار می دهیم تا وقتی که حباب هایی ته ارلن تشکیل شود که نشان دهنده ی به جوش آمدن محلول می باشد (ارلن را روی هیتر تکان می دهیم تا ته نگیرد) قبل از سررفتن محلول با پنبه و فویل سر ارلن را می بندیم وبعد از به جوش آمدن محلول ، آن را به داخل اتوکلاو بادمای 121درجه ی سانتی گراد و فشار 1اتمسفر به مدت 15دقیقه قرار می دهیم.بعد از اتوکلاو و سرد شدن محلول محیط کشت آن را به داخل چندین پتری دیش و لوله ی آزمایش منتقل می کنیم باید دقت شود که لوله های آزمایش را شیب دار قرار دهیم تا محیط کشت شیب داری حاصل شود سپس چند لحظه منتظر می شویم تا محلول سفت شود بعد ازآن، آن ها را درون انکوباتور با دمای 137درجه ی سانتی گراد به مدت 24ساعت منتقل می کنیم و در پایان برای نگه داری محیط های کشت، آن ها رادرون یخچال قرار می دهیم.

Nutrient broth: ابتدا 3/1گرم از این ماده را برداشته و داخل ارلن با100سی سی آب مقطر حل می کنیم محلول حاصل را به لوله های آزمایش که هر کدام حاوی 5سی سی می باشد منتقل می کنیم.درب لوله ها را به کمک پنبه می بندیم و آن ها را داخل بشر می گذاریم ودرب بشر را به کمک فویل می بندیم.و در پایان برای نگه داری محیط های کشت آن ها را درون یخچال قرار می دهیم.

منابع خطا:

اگر در حین آزمایش باکتری وارد محیط کشت شود در پایان پرگنه باکتری مشاهده می شود که مربوط به آلودگی ثانویه می باشد.

نتایج کار:

در پایان ما محیط های کشتی آماده کردیم که برای کشت باکتری به آن ها نیاز است.